Selasa, 28 Oktober 2008

Teknik Gel Test

Tehnik Gel Test
Dalam Pemeriksaan Serologi Golongan Darah

Pendahuluan :

Gel Test ditemukan pertama kali oleh Y.Lapierre pada tahun 1984 di Regional Blood Transfusion Center of Lyon. Lapierre telah melakukan bermacam-macam percobaan, misalnya dengan Gelatin, polyacrylamide,Solid nets,Silica Beads, Ficoll dan Dextran gels.

Dan akhirnay Lapierre menemukan bahwa pemeriksaan yang terbaik untuk dapat membedakan antara reaksi positip dengan reaksi negatip secara jelas dan stabil, yaitu dengan menggunakan Sephadex G 100 Superfine yang secara kebetulan ditemukan, oleh karena kesalahan tehnisi laboratorium saat memesan Sephadex G 100 yang seharusnya Sephadex G 25.

Akhirnya untuk menentukan parameter centrifugasi, bentuk tube dan komposisi medium serta antiglobulin serum yang sesuai tidak membutuhkan waktu yang lama,sehingga pada :

§ Tahun 1985 dilakukan regiatrasi patent yang pertama

§ Tahun 1987 uji coba di lapangan

§ Tahun 1988 dibuat kit pertama

Metode gel test dapat digunakan pada pemeriksaan :

§ Sistim golongan darah ( ABO,Phenotyp Rhesus, subgroup A dan H, Kell, Duffy, Kidd, Lewis, MNS, P1, Lutheran, dan profil antigen lainnya.

§ Uji Cocok Serasi

§ Skrining antibodi

§ Identifikasi antibodi

Persiapan bahan pemeriksaan :

§ Pisahkan sel darah merah dengan plasma/ serum

§ Biarkan larutan ID Diluent 2 ( modified LISS ) pada suhu kamar

§ Buat suspensi sel daerah merah 5% dalam larutan LISS, yaitu :

Ø 500 ul diluent 2 ( modified LISS ) + 50 ul whole blood

Ø 500 ul diluent 2 ( modified LISS ) + 25 ul packed red cells

Persiapan bahan pemeriksaan terhadap sampel yang memiliki kelainan :

Ø Sampel dengan cold aglutinin

· Hangatkan sampel selama 20 menit pada suhu 37°C

· Pisahkan serum dan sel dalam keadaan hangat / suhu 37°C

· Cuci sel dengan saline hangat sampai dengan tidak ada aglutinasi

· Biarkan larutan ID Diluent 2 ( modified LISS ) pada suhu kamar

· Buat suspensi sel daerah merah 5% dalam larutan LISS, yaitu :

Ø 500 ul diluent 2 ( modified LISS ) + 25 ul packed red cells

Pemeriksaan Golongan Darah ABO / Serum Grouping dan Rhesus faktor

( Mengandung monoclonal antiserum )

Bahan pemeriksaan dan reagen :

1. ID card : ABO/D(VI.)-ctl/ A1-B ( ABO/D + Revers Grouping )

2. Larutan ID diluent 2 ( modified LISS )

3. Standar sel A 5% dan standar sel B 5%.

4. Sampel sel suspensi 5% dalam diluent 2

5. Sampel serum/plasma

Peralatan :

1. ID. Centrifuge

2. ID. Inkubator

3. ID. Working table ( ID card holder & tube holder )

4. ID. Pipetor

5. Tips

6. ID. Dispenser ( ukuran 0.5 ml )

7. ID. Rider M ( Equepment for automated prosedures )

Cara pemeriksaan :

1. Siapkan ID card ABO/D + Revers Grouping

2. Beri label nama pasien / nomor donor pada ID card

3. Buka penutup card ( alumunium foil )

4. Teteskan 10 ul standar sel-A 5% juga 10 ul standar sel-B 5% kedalam microtube no 5 dan 6 (A1 dan B)

5. Teteskan 10 ul sampel sel 5% kedalam microtube no .4

6. Teteskan 25 ul sampel serum/plasma kedalam microtube no. 4, 5 dan 6

7. Diamkan pada suhu kamar selama 10 menit

8. Teteskan 10 ul sampel sel suspensi 5% kedalam mikrotube no. 1, 2, dan 3 (-A,-B,-D)

9. Putar ID card selama 10 menit dalam ID centrifuge

10. Baca dan catat hasil

Interpretasi hasil :

· Positip : Bentuk aglutinasi sel pada permukaan gel atau bentuk aglutinasi

sel menyebar pada gel.

· Negatip : sel padat didasar microtube

Pemeriksaan uji cocok serasi dengan LISS / Coombs

( mengandung AHG : Rabbit anti IgG, monoclonal C3d )

Bahan pemeriksaan dan reagen :

1. ID card : Liss / Coombs

2. Larutan ID diluent 2 ( modified LISS )

3. Sampel suspensi 1% pasien / donor dalam diluent 2

4. Sampel Serum/plasma pasien / donor

Peralatan :

1. ID. Centrifuge

2. ID. Inkubator

3. ID. Working table ( ID card holder & tube holder )

4. ID. Pipetor

5. Tips

6. ID. Dispenser ( ukuran 0.5 ml )

7. ID. Rider M ( Equepment for automated prosedures )

Cara pemeriksaan :

1. Siapkan ID card Liss/Coombs

2. Beri label nama pasien/nomor donor pada ID card

3. Buka penutup card ( alumunium foil )

4. Mayor :

Microtube I : 50 ul sel donor suspensi 1% + 25 ul serum pasien

5. Minor :

Microtube II : 50 ul sel pasien suspensi 1% + 25 ul serum donor

6. Auto Kontrol :

Microtube III : 50 ul sel pasien suspensi 1% + 25 ul serum pasien

7. Inkubasi ID card selama 15 menit pada suhu 37ºC

8. Putar ID card selama 10 menit dalam ID centrifuge

9. baca dan catat hasil

Interpretasi hasil :

· Positip : Bentuk aglutinasi sel pada permukaan gel atau bentuk aglutinasi

sel menyebar pada gel.

· Negatip : sel padat didasar microtube

Pemeriksaan Direck coombs test

( DC Screening II : mengandung monospesifik anti-IgG dan anti-C3d )

Bahan pemeriksaan dan reagen :

1. ID card : Liss / Coombs

2. Larutan ID diluent 2 ( modified LISS )

3. Sel pasien suspensi 1% dalam diluent 2

Peralatan :

1. ID. Centrifuge

2. ID. Inkubator

3. ID. Working table ( ID card holder & tube holder )

4. ID. Pipetor

5. Tips

6. ID. Dispenser ( ukuran 0.5 ml )

7. ID. Rider M ( Equepment for automated prosedures )

Cara pemeriksaan :

1. Siapkan ID card DC Screening II

2. Beri label nama pasien pada ID card

3. Buka penutup card (alumunium foil)

4. Tambahkan 50 ul sel pasien suspensi 1% kedalam masing-masing microtube no. 1, 2, 3 ( IgG, C3d, Control )

5. Putar selama 10 menit dalam ID centrifuge

6. Baca dan catat hasil

Interpretasi hasil :

· Positip : Bentuk aglutinasi sel pada permukaan gel atau bentuk aglutinasi

sel menyebar pada gel.

· Negatip : sel padat didasar microtube

Pemeriksaan Screening antibody

( mengandung AHG : Rabbit anti IgG, monoclonal C3d )

Bahan pemeriksaan dan reagen :

1. ID card : Liss / Coombs

2. Larutan ID diluent 2 ( modified LISS )

3. Sel pasien suspensi 1% dalam diluent 2

4. Sel panel kecil (abtectcell ) suspensi 1% dalam diluent 2

Peralatan :

1. ID. Centrifuge

2. ID. Inkubator

3. ID. Working table ( ID card holder & tube holder )

4. ID. Pipetor

5. Tips

6. ID. Dispenser ( ukuran 0.5 ml )

7. ID. Rider M ( Equepment for automated prosedures )

Cara pemeriksaan :

1. Siapkan ID card Liss/Coombs

2. Beri label nama pasien pada ID card

3. Buka penutup card (alumunium foil)

4.

· S1 à Microtube I : 50 ul sel S1(abtectcell) suspensi 1%

· S2 à Microtube II : 50 ul sel S2 (abtectcell ) suspensi 1%

· Auto kontrol à Microtube III : 50 ul sel pasien suspensi 1%

  1. Teteskan masing-masing 25 ul serum pasien pada microtube I, II, III
  2. Inkubasi pada suhu 37°C selama 15 menit dalam ID Inkubator
  3. Putar selama 10 menit dalam ID centrifuge
  4. Baca dan simpulkan sesuai dengan tabel sel panel serta catat hasil

Interpretasi hasil :

· Positip : Bentuk aglutinasi sel pada permukaan gel atau bentuk aglutinasi

sel menyebar pada gel.

· Negatip : sel padat didasar microtube

Pemeriksaan Identifikasi antibody

( mengandung AHG : Rabbit anti IgG, monoclonal C3d )

Bahan pemeriksaan dan reagen :

1. ID card : Liss / Coombs

2. Larutan ID diluent 2 ( modified LISS )

3. Sel pasien suspensi 1% dalam diluent 2

4. Sel panel besar (Phenocell) suspensi 1% dalam diluent 2

5. Standar sel A 5% atau 1% dan standar sel B 5% atau 1% dalam diluent 2.

Peralatan :

1. ID. Centrifuge

2. ID. Inkubator

3. ID. Working table ( ID card holder & tube holder )

4. ID. Pipetor

5. Tips

6. ID. Dispenser ( ukuran 0.5 ml )

7. ID. Rider M ( Equepment for automated prosedures )

Cara pemeriksaan :

1. Siapkan ID card Liss/Coombs

2. Beri label nama pasien pada ID card

3. Buka penutup card (alumunium foil)

4.

· 1 à Microtube 1 : 50 ul Phenocell no.1 suspensi 1%

· 2 à Microtube 2 : 50 ul Phenocell no.2 suspensi 1%

· 3 à Microtube 3 : 50 ul Phenocell no.3 suspensi 1%

· 4 à Microtube 4 : 50 ul Phenocell no.4 suspensi 1%

· 5 à Microtube 5 : 50 ul Phenocell no.5 suspensi 1%

· 6 à Microtube 6 : 50 ul Phenocell no.6 suspensi 1%

· 7 à Microtube 7 : 50 ul Phenocell no.7 suspensi 1%

· 8 à Microtube 8 : 50 ul Phenocell no.8 suspensi 1%

· 9 à Microtube 9 : 50 ul Phenocell no.9 suspensi 1%

· 10 à Microtube 10 : 50 ul Phenocell no.10 suspensi 1%

· 11 à Microtube 11 : 50 ul Phenocell no.11 suspensi 1%

· A/B à Microtube 12 : 50 ul sel segolongan dengan pasien

( A/ B suspensi 1% )

5. Teteskan masing-masing 25 ul serum pasien pada microtube 1-12

6. Inkubasi pada suhu 37°C selama 15 menit dalam ID Inkubator

7. Putar selama 10 menit dalam ID centrifuge

8. Baca dan simpulkan sesuai dengan tabel sel panel serta catat hasil

Interpretasi hasil :

· Positip : Bentuk aglutinasi sel pada permukaan gel atau bentuk aglutinasi

sel menyebar pada gel.

· Negatip : sel padat didasar microtube

Daftar pustaka :

    1. Tehnik Gel Test, oleh DR. Med Ellyani Sindu pada pelatihan dokter kepala UTD PMI Jakarta 2001
    2. Tehnik Gel Test, oleh DR. Med Ellyani Sindu pada pelatihan dokter kepala UTD PMI Jakarta 2002
    3. Makalah Workshop Bangkok April 2002
    4. Leaflet DC – Screening II DAT Diamed – ID micro typing system
    5. Denise M. Harmening, Modern Blood Banking and Transfusion Practices
Diposting oleh di

Tidak ada komentar:

Posting Komentar

Langganan: Posting Komentar (Atom)